کلونینگ، بیان و خالص‌سازی زیرواحدهای α، βa و βb پروتئین اینهیبین انسانی در اشرشیاکلی
Authors
Abstract:
زمینه و هدف: اینهیبین، یک هورمون گلیکوپروتئینی است که به‌طور معمول در گردش خون وجود دارد، اما در برخی بیماری‌ها میزان آن افزایش می‌یابد و اندازه‌گیری آن به روش سرولوژی با استفاده از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال علیه آن نیز می‌تواند به تشخیص برخی بیماری‌های ژنتیکی کمک کند. این مطالعه با هدف کلونینگ، بیان و خالص‌سازی زیرواحدهای α، βa و βb پروتئین اینهیبین انسانی در اشرشیاکلی انجام شد. روش بررسی: برای ژن هرکدام از زیرواحدهای اینهیبین، یک جفت پرایمر طراحی گردید، سپس توالی ژنی هریک از زیرواحدهای اینهیبین به روش PCR(واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) از DNA (دزوکسی ریبونوکلئوتید اسید) ژنومی انسان به دست آمد و پس از هضم آنزیمی در وکتور pET22b کلون شد. وکتور نوترکیب مربوط به هریک از زیرواحد‌ها، به میزبان اشرشیاکلی (سویه BL21) انتقال یافت. سلولهای ترانسفورم‌شده در محیط کشت LB حاوی آمپی‌سیلین کشت داده شدند، سپس کلنی‌های مثبت جهت تولید انبوه پروتئین نوترکیب جداسازی گردید. پس از کشت انبوه و القای سویه‌های ترانسفورم‌شده با IPTG (ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوپیرانوزید)، پروتئین نوترکیب تولید‌شده به کمک روش کروماتوگرافی میل ترکیبی ستون نیکل جداسازی شد. یافته‌ها: ژن زیرواحدهای هورمون اینهیبین به‌درستی در وکتور pET22b کلون و بیان آن در اشرشیاکلی، به‌طور قابل‌ملاحظه‌ای بالا بود. نتایج حاصل از بیان هورمون اینهیبین نشان داد درصورت عدم انجام بهینه‌سازی کدونی، بیان اینهیبین در میزبان پروکاریوت به‌طور قابل‌توجهی بالا می‌رود. زیرواحدهای پروتئینی α، βa و βb هورمون اینهیبین به ترتیب با اوزان مولکولی 7/13، 12 و 12 کیلودالتون خالص‌سازی شدند. نتیجه‌گیری: زیرواحدهای پروتئینی هورمون اینهیبین به‌دلیل اندازه کوچک و توالی کوتاه ژن، همچنین تغییرات بعد از ترجمه‌ای اندک، در میزبان پروکاریوتی قابل‌بیان هستند.
similar resources
کلونینگ، بیان و تخلیص فیتاز تغییریافته اشرشیاکلی
هدف: فیتازها گروهی از فسفاتازها هستند که قادر به هیدرولیز فیتیک اسید می‌باشند. فیتازها با تجزیه‌ی فیتات قادر به کاهش یا حذف اثرات مخرب فیتات هستند. فیتاز اسیدی و مقاوم دمایی همراه با تولید بالا و خالص و البته یک سیستم نسبتاً ارزان دارای کاربرد در مقیاس وسیع می‌باشد. لذا در این مطالعه با تغییراتی در توالی آنزیم، تولید فیتاز نوترکیب با طول کم‌تر و میزان بیان بیش‌تر مورد بررسی قرار گرفت. مواد و رو...
full textکلونینگ و بیان ژن اینترفرون آلفاb2ی انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی
زمینه و هدف: اینترفرون‌ها وسیلة دفاعی بدن علیه ویروس‌ها هستند که به سرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولید پروتئین‌هایی که تکثیر ویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل می‌کنند، تحریک می‌کنند. با توجه به اهمیت دارویی اینترفرون آلفا b2 انسانی در ایران و جهان، تولید این دارو در داخل کشور و از طریق بیوشیمیایی امکان‌پذیر اما بسیار مشکل می‌باشد. زیرا تولید این ...
full textکلونینگ و بیان اریتروپوئتین نوترکیب انسانی در اشرشیاکلی
اریتروپوئیتین نوترکیب انسانی (rhepo) بطور وسیع در درمان کم خونی استفاده می شود. اما به دلیل نیمه عمر کم، مصرف آن به عنوان دارو محدود شده است زیرا برای رسیدن به اثرات درمانی باید هفته ای 3-2 بار آن را تزریق نمود. مطالعات زیادی به منظور افزایش نیمه عمرin vivo اریتروپوئیتین صورت گرفته که از آنها می توان به مهندسی قند، اتصال به قسمت ثابت ایمنوگلبولین ها و اتصال به پلیمر پلی اتیلن گلیکول اشاره نمود....
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25
Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...
full textکلونینگ و بیان پروتئین فاکتور رشد جفتی-1 انسانی (hPLGF-1) در سیستم بیانی Rosetta E.coli
سابقه و هدف: آنژیوژنزیس یا شکل گیری عروق خونی جدید در شرایط فیزیولوژیک و پاتولوژیک مهم ترین عامل رشد و تکثیر سلول ها است. پروتئین PLGFیا فاکتور رشد جفتی یکی از مهم ترین پروتئین ها در تحریک آنژیوژنزیس است. در این پژوهش، ژن PLGF-1 انسانی از بافت جفت جدا شده و پروتئین مورد نظر در سیستم باکتریایی بیان شد. روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ناحیه کد کننده ژن PLGF-1 از بافت جفت انسان توسط پرایمرهای اخ...
full textکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
full textMy Resources
Journal title
volume 12 issue 5
pages 44- 52
publication date 2018-07
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023